Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

–

приготовление  питательной  среды,  состав  которой  состоит  из  100 мл
раствора  Эрла,  20  mМ  HEPES,  4,0 мл  куриного  эмбрионального
экстракта,  4,0 мл  сыворотки  крови  плода  корoвы,  10 мл  1%  агара,
разогретого до температуры 40 – 50 ºС, и антибиотиков.

Среду разливают в лунки пластиковой панели, закрывают крышкой и

оставляют при температуре 20 – 22 °С до застывания среды.

После этого в лунку со средой помещают фрагмент кожи (5-7 мм) 9 сут

куриного эмбриона. Испытуемые клеточные культуры снимают с подложки
общепринятым методом, ресуспендируют в питательной среде 199, и на три
кожных фрагмента наносят по 1,0 мл испытуемой клеточной суспензии в
виде капли в концентрации 10

кл/мл.

Таким же образом на 2 - 3 кожных фрагмента наносят суспензию

клеток HeLa (положительный контроль). В качестве отрицательного
контроля оставляют 2 - 3 неинокулированных фрагментов кожи.

Панель закрывают крышкой и инкубируют в атмосфере СО

при

температуре 36 - 37 ºС.

Через 72 ч инкубации готовят гистологические препараты фрагментов

кожи толщиной по 5 – 7 микрон и окрашивают гематоксилин-эозином.

Опыт учитывают, если:
а) в контрольных фрагментах кожи не отмечено признаков деструкции

органной культуры;

б) в положительном контроле имеются признаки инвазии испытуемых

клеток в органные культуры кожи куриного эмбриона, т.е. проникновение и
распространение пролиферирующих клеток в собственно дерму.

Клетки испытуемых клеточных культур рассматривают как

туморогенные, если хотя бы в одном из образцов органной культуры
наблюдается инвазивный рост.

Изучение онкогенности