Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

В жидкую питательную среду, используемую для культивирования

испытуемого штамма, содержащую 2,4 и 6,5 % натрия хлорида (pH 6,8 – 7,0),
засевают исследуемую пробиотическую культуру (по 1 петле на 10 мл среды)
и выдерживают в термостате при оптимальной для штамма температуре в
течение 48 ч.

Рост или отсутствие роста культуры отмечают визуально (после

встряхивания пробирки) по наличию или отсутствию помутнения, а также
выборочно контролируют путем микроскопии препаратов, приготовленных
из культуральной среды по окончании инкубирования посевов.

9. Определение продукции бактериоцинов производственным

пробиотическим штаммом

На чашках с 1,5 % питательным агаром

Difco

размечают точки,

соответствующие количеству штаммов, и помещают на размеченные участки
по  2–5  мкл  суспензии  12-часовой  культуры  испытуемых  микроорганизмов.
Количество чашек должно соответствовать количеству тест-культур с учётом
контрольных  чашек.  Чашки  инкубируют  при  температуре  (37  ±  1)  °С  в
течение  4–12  ч.  Продукцию  бактериоцина  испытуемым  штаммом
инициируют  УФ-облучением  в  течение  30  с,  затем  культуру  инкубируют  в
тех же условиях еще 3– 2 ч. После культивирования в течение 48 ч проводят
инактивацию  культур  хлороформом  следующим  образом:  чашку  Петри
переворачивают вверх дном, снимают крышку, поднимая чашку со средой, и
кладут в крышку фильтровальную бумагу, смоченную 300 мкл хлороформа.
После  экспозиции  в  течение  30  мин  заменяют  крышки  с  хлороформом  на
чистые  и  стерильные,  а  инактивированные  посевы  проветривают  около  15
мин.  После  этого  на  уже  имеющийся  слой  агара  наслаивают  3–5  мл  0,7  %
агара, содержащего 10

КОЕ/мл тест-штамма. Инкубируют в течение 12–16 ч

при температуре (37± 1) °С.

После инкубации регистрируют наличие зон просветления в слое тест-

культуры вокруг пятен исследуемых штаммов. Таким способом можно
одновременно оценить способность исследуемого штамма продуцировать