Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости на

спектрофотометре в кюветах с толщиной слоя 10 мм при длине волны
541 нм. Раствор сравнения – буферный раствор.

Рассчитывают степень гемолиза (Y) по формуле (3):

𝑌

Aп−Ao
Aк−Ao

где: Ап – среднее значение оптической плотности испытуемой пробы;

Ао – среднее значение оптической плотности контрольной пробы

без гемолиза;

Ак – среднее значение оптической плотности контрольной пробы с

полным гемолизом.

С помощью программного обеспечения или на миллиметровой бумаге

с логарифмическим масштабом строят график со значениями Y/(1-Y) по оси
абсцисс  и  количеством  разведенного  комплемента  (в  мл)  по  оси  ординат.
Получают  оптимизированную  кривую  (при  построении  графика
учитываются значения степени гемолиза, находящиеся в диапазоне от 0,15 до
0,85;  значения,  находящиеся  за  пределами  указанного  диапазона  не
учитываются),  соответствующую  нанесенным  точкам,  и  определяют
ординату для дозы комплемента, приводящей к 50% гемолизу, т.е. Y/(1-Y)=1.

Вычисляют активность комплемента в исходном растворе,

выраженную в гемолитических единицах (СН

/мл), по формуле (4):

СН

/мл =

С∙5

где: В – величина, обратная степени разведения комплемента;

С – объем разведенного комплемента (мл);

вызывающий 50% гемолиз (Y/(1-Y)=1);

5 – множитель для учета количества эритроцитов.

Результат титрования комплемента считают достоверным при условии,

что наклон прямой составляет от 0,15 до 0,40, предпочтительно в интервале
0,18-0,30.