Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

возможные  критические  модификации  в  плазмиде  и  подтвердить  ее  подлин-
ность),  полимеразной  цепной  реакции,  секвенированием  нуклеотидной  после-
довательности плазмиды/вектора. Выбор методов оценки подлинности должен
быть обоснован и указан в фармакопейной статье или нормативной документа-
ции  на  препарат.  Если  на одной производственной  площадке производят раз-
личные ДНК вакцины, метод оценки подлинности должен быть способен одно-
значно  идентифицировать  каждую  производимую  плазмиду/вектор  в  присут-
ствии остальных.

Концентрация вектора, его форма.

Концентрация ДНК должна быть

выше 500 нг/мл и может быть определена путем измерения величины поглоще-
ния при длине волны 260 нм. Величина поглощения раствора двойной кольце-
вой ДНК в концентрации 50 мкг/мл составляет 1 (удельное поглощение 200).

Содержание ДНК в концентрации менее 500 нг/мл определяется после

инкубирования с флуоресцентным красителем, который избирательно связыва-
ется  с двойной кольцевой  ДНК  и использованием  стандартного образца  ДНК
для  построения  калибровочного  графика.  Для  определения  плазмидной  ДНК
также  может  быть  использована  жидкостная  хроматография  с  применением
стандартного  образца.  В  некоторых  случаях  используется  капиллярный  элек-
трофорез.

Должно быть указано допустимое количественное содержание плазмиды

в суперскрученной конформации. Для количественного определения су-
перскрученных форм может быть использована высокоэффективная анионооб-
менная жидкостная хроматография или капиллярный электрофорез. Испытания
проводят в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматогра-
фия» и «Капиллярный электрофорез».

Капиллярный электрофорез также пригоден для количественного опреде-

ления других форм. Для вирусного вектора должна быть указана концентрация
инфекционных частиц. Могут быть использованы иные критерии, если пред-
ставлены доказательства того, что они позволяют предсказать иммуногенность
или другую биологическую активность.