Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

(5,0±0,5) % СО

. Затем в каждую лунку с ИП и соответствующим СО вносят

вирусную суспензию, содержащую рассчитанную заранее дозу индикаторно-
го вируса

−

100 ТЦД

. В лунки контроля клеток вносят такой же объем под-

держивающей среды.

Определение дозы вируса-индикатора

Определение дозы индикаторного вируса начинают с установления его

активности.

Для определения активности вируса-индикатора готовят десятикратные

разведения вируса в поддерживающей среде (от 10

-1

до 10

-8

). Из лунок 96-

луночного планшета с клеточным монослоем удаляют ростовую среду. После
этого вносят в лунки планшета, используемые для определения дозы вируса,
поддерживающую среду в объеме, равном объему испытуемого образца. За-
тем вносят приготовленные разведения индикаторного вируса (не менее, чем
по 4 лунки на каждое разведение) в объеме, равном объему внесенной до это-
го поддерживающей среды. 96-луночный планшет с разведениями вируса
инкубируют в течение 24-48 ч при температуре (37±1)

С в атмосфере с

(5,0±0,5) % СО

. За титр (активность) вируса принимают величину, обратную

разведению вируса, при котором клеточный монослой в 50 % лунок оказался
полностью пораженным цитопатическим действием. Титр вируса выражают
в тканевых цитопатических дозах – ТЦД

/мл.

Активность вируса вычисляют методом Спирмена-Кербера по форму-

ле:











 −

•

max

где:

Lg ED

– десятичный логарифм титра вируса;

max

– десятичный логарифм разведения, ниже которого произошла

100 % гибель клеток (+);
d

−

десятичный логарифм интервала между разведениями (=1,0);

−

число лунок, приходящееся на каждое разведение вируса (=4);