р
−
число лунок, давших гибель (+) в
разведении, ниже которого про-
изошла 100 % гибель клеток, и последующих разведениях.
После установления активности вируса производят подсчёт дозы для
последующего внесения в лунки с испытуемым препаратом (100 ТЦД
50
).
Одновременно с внесением вируса-индикатора осуществляют контроль
взятой дозы вируса на 16-ти лунках с культурой клеток (по 4 лунки на каждое
разведение вируса).
Вносят вирус, начиная с разведения, соответствующего 100 ТЦД
50
, и до
разведения, соответствующего 0,1 ТЦД
50
с коэффициентом разведения равным
10.
Лунки с культурой клеток для оценки состояния монослоя клеток остаются
интактными.
После внесения индикаторного вируса в дозе 100 ТЦД
50
96-луночный
планшет инкубируют в течение 24-48 ч при температуре (37±1)
0
С в атмосфере с
(5,0±0,5) % СО
2
до появления первых признаков цитопатических изменений в
клеточном монослое с индикаторным вирусом в дозе 1 ТЦД
50
. Монослой в лун-
ках с 0,1 ТЦД
50
индикаторного вируса должен соответствовать состоянию клеток
в контрольных лунках.
Учёт активности интерферона осуществляют через 24-48 ч при выполне-
нии следующих условий:
•
доза внесённого вируса соответствует 100 ТЦД
50
;
•
в лунках с клетками и минимальными концентрациями ИП и СО, зара-
женными индикаторным вирусом, наблюдается практически полный ци-
топатический эффект (80
−
100 %);
•
в лунках с контролем клеток отсутствуют признаки дегенерации.
Учёт активности интерферона осуществляют визуально или инструмен-
тально.
Предыдущая < | 2745 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF